质粒的转换的方法有哪些?质粒转化后如何筛选？
转化的方法：最常用的是感受态法，包括热激和电转化等，转染不是转化，这是不同的概念。
转化后，可以根据质粒上带有的某种特殊基因的表达来鉴定菌落，最常用的有：抗药性基因的表达，比如质粒带有氨苄抗性基因，能在AMP平板上长的一般可以初步判断为转化成功的菌；还有就是显色筛选，比如质粒上的LacZ基因表达，间接促使添加了X-gal的培养基变蓝，绿色荧光蛋白基因表达后菌落发荧光等。
要提高质粒的转化效率, 实验中要考虑几个重要因素?求大神赐教？
列几个影响因素：
1，没有3‘端突出端
2，存在嘧啶二聚体，不能连接
3，插入片段与载体比例不理想
4，培养基放置时间过长 等等 消除上面的影响因素可以提高质粒转化效率，另外，用好点的载体可以提高转化效率
质粒转化后得到的阳性克隆有哪些方法可以鉴定?并说明鉴定的依据？
1.将质粒转入DH5α的感受态态细菌中，涂布于含有氨苄抗性的固体培养板上，过夜培养。
2.挑选单克隆，转接3-5ml含氨苄抗性的液体培养基，37度振荡培养10-12h。
3.提取质粒（步骤省略），并将质粒进行进行琼脂糖凝胶电泳，一般可以观察到2-3条带，选择其中最下面一条带（超螺旋形式）大小约为2000左右的克隆。
4.以上述挑选的克隆质粒为模版，以M13为引物，进行PCR检测（步骤省略，退火温度为55度），注意设置阴性和阳性对照。
5.PCR产物，进行琼脂糖凝胶电泳，注意选择合适的DNA分子量Marker，比如DL2000。
6.扩展产物为750bp左右条带的即为正确的克隆。
转化质粒浓度一般多少合适？
一般来说10~100ng都可以，不过其实我们真正做的时候就是不管浓度多大（浓度约在100ng/ul以上），都是取1ul的质粒溶液，稀释10倍，就是10ul,加入到100ul的感受态细胞里~1、“切开的质粒”等于“线性dna”。
2、“线性dna转化细菌、以及真菌的原生质体”已经成功。
所以，切开的质粒能转化进入感受态细菌。但是，不能复制。如果质粒上带有与细菌染色体上同源序列，质粒可以重组交换到细菌染色体上。例如构建突变或增加外源基因等。
质粒转化原因？
质粒转化时先在冰中放置半小时后再42度热激的原因： 热激法：大肠杆菌在0℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表达，在选择性培养基平板上可挑选所需的转化子。所以，预先需要先在冰水中旋转半小时。 也可以用电转化法：外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，不仅有利于离子和水进入细菌细胞，也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。
